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黃龍病 (Citrus Greening)

前 言:
  
柑橘黃龍病(Citrus Huanglangbing)於1943年在中國大陸華南以此病名首次發表,但此病早於1925就在華南開始發生危害。於1947年南非以”Greening”(維綠)病名報告成為英文的通用名稱。此病因地區有不同病名,在臺灣1951開始發病稱為立枯病(Likubin),1960年代東南亞開始發生,菲律賓叫為黃萎病(Leaf mottle yellows),在印度稱為柑橘梢枯(Citrus dieback),在印尼稱為柑橘葉脈韌皮部退化(Citrus vein phloem degeneration),絕大多數亞洲柑橘產區皆受此病嚴重危害,而在南非亦有蔓延。依照溫度對病徵表現之影響,南非黃龍病分類為熱敏感型,在22~24℃涼溫下引起嚴重病徵,並由南非柑橘木蝨(Trioza erytreae)傳播;亞洲黃龍病則屬於耐熱型,在27~32℃高溫或涼溫下均可引起病徵,且由亞洲柑橘木蝨(Diaphorina citri)傳播。臺灣從1951年起此病開始發生,當時即以立枯病稱之,之後此病迅速蔓延在北部柑橘產區,椪柑、桶柑、甜橙普遍嚴重發病,使樹齡縮短為10年以下,影響產量與品質極大。從70年代新病原系統出現為害向來抗病之柚類,致此無抗病柑橘品種存在。黃龍病普遍流行發生已成為臺灣柑橘生產之限制因子之一,因而研討綜合防治策略,建立無病柑苗之生產制度與田間健康管理技術。

病 徵:
  
雖其病徵群因柑橘品種略有差異,此病一般病徵為葉脈及相鄰組織黃化,隨著全葉變黃或萎黃,有時葉脈木栓化。遂隨落葉、稍枯、細根及側根之腐朽,樹勢衰弱而終於全株死亡。病葉變硬而向外彎曲,未熟落葉後長出細長幼葉呈缺鋅症狀。罹黃龍病樹株矮化,產生季節外多花,多半花落而結不整形小果,色淡略帶綠,皮厚,果軸硬化質劣。

病原菌:

(一)

名稱
  學名:Libaerobacter asiaticum

(二)

寄主範圍
  
亞洲型之病原菌亦演化複雜而可分為感染寬皮柑及橙類之系統(Mandarin strain),為害柚類及柑、橙類之柚系統(Pummelo strain)及無病徵弱系統(Symptomless strain)。此病菌往往與柑橘萎縮病毒( Tristeza virus )複合感染加重病徵。

(三) 形態
  引起黃龍病之病原係不能培養的特殊細菌(fastidious bacteria = GFB),存於篩管在病株中成為系統性,近年來亦暫時被命名為Libaerobacter asiaticum。由連續超薄切片之電顯相片顯示此菌之立體構造,證實此菌成熟體通常為直桿狀350~550 X 600~1,500 nm,由兩層外膜包圍,20~25 nm 厚。此菌體係多形性,生出彎曲性長桿體,新生菌體大小約100~250 X 500~2,500 nm,當其衰老後成為球狀體,直徑 700~800 nm含有稀薄細胞質。此菌通常以出芽式繁殖,罕見以雙裂法或連珠狀增殖。此病原分為兩型,南非黃龍病分類為熱敏感型,在22~24℃涼溫下引起嚴重病徵,亞洲黃龍病則屬於耐熱型,在27~32℃高溫或涼溫下均可引起病徵。
(四) 診斷技術
  黃龍病之田間診斷主要根據葉部及果實病徵來判別,而進一步之鑑定工作則有賴精確而敏感之診斷技術。黃龍病在寄主體內含量低且分布不均,電顯檢驗偵測不易。傳統的生物檢定法(bioassay)因病原潛伏期長,往往費力而耗時。目前由台大植病系病毒研究室所研發之核酸探針(DNA probes)法與聚合酵素連鎖反應(PCR)鑑定法,可供快速而正確之病原偵測,對此病之檢疫及無病種苗管理有利,而對流行病學研究有助益。 
  黃龍病原核酸探針乃得自病原DNA之純化與選殖(cloning)。選殖所得之具有病原特異性DNA片段經生物素標誌(biotin-labeling)而成為一非放射性核酸探針,並搭配點漬雜配法(dot hybridization),可正確而敏感偵測病原。 此法已被廣泛應用於黃龍病原之鑑別與生態研究。唯因此法所包括步驟較多,自抽取病原核酸、雜配以至呈色約需時兩天。為求更快速敏感的診斷方法,近年已開發出PCR鑑定法。
  病原特異性DNA片段經定序(sequencing)後,從中尋找一對引子對(primer pair),作為PCR增幅之用。此引子對(命名為 228-primer pair)證實具有病原專一性,並對亞洲型黃龍病原,包括臺灣、日本琉球、中國大陸、馬來西亞、越南、泰國、沙烏地阿拉伯等皆可反應;但對南非型黃龍病則不反應,表示此引子對對亞洲型病原(Liberobacter asiaticum)有特異性。重複PCR能增加敏感度,偵測到無病徵病株中極低濃度GFB。PCR鑑定法將病原偵測時間縮短至七小時:核酸抽取需三小時;PCR增幅反應需三小時; 電泳分析(agarose gel)需一小時。此為目前較迅速之黃龍病診斷法。
  關於核酸探針點漬雜配法與PCR鑑定法之所有詳細操作步驟,日前已詳載於亞太糧肥中心出版之專刊 ”Detection of greening fastidious bacteria (GFB) causing citrus greening by dot hybridization and polymerase chain reaction (PCR) with DNA probes and primer pairs”。
   

發生生態 :
  
以染病的芽穗經嫁接繁殖之苗木係主要傳病途徑,即帶病柑苗係普遍傳播之途徑,而成為田間蔓延之傳染源。在果園中亞洲木蝨(Diaphorina citri kuwayama)以永續性方式傳播此病菌,但不經卵傳播。傳播能力因木蝨生態型而有差異,例如臺灣生態型傳播力較低,但田間此媒介木蝨傳播可能顯著,因柑苗生長萌芽期暴露於野外受木蝨累積高族群傳染,故感染率頗高。七里香(Murraya paniculata)係木蝨生殖最喜好的寄主,但經研究發現它並非為此菌之中間寄主。此病菌在柑樹中轉移慢,而感染初期局限於木蝨傳染的部分枝條中,經數年月在樹中轉移蔓延全株。最近經人工接種及田間調查發現野生之木蝨寄主烏柑仔(Severinia buxifolia Oliver)為此病菌之中間寄主,能做為傳染源而經木蝨傳染到柑橘株。柑橘木蝨之其他兩種寄主木蘋果(Limonia acidissima Linn)及山黃皮(Murraya euchrestifolia Hay)經接種試驗證實並非為此病原之寄主。
  屬於耐熱性亞洲型之本地病菌,在高低溫下均可發病呈現病徵。各病菌系統對國內所種所有品種品系均為感染性而發病,此病菌往往與CTV複合感染,加強發病,尤其肥培管理不良之園中發病加速而嚴重。

防治方法:
  
蟲媒的系統性黃龍病,至今尚無有效之農藥可防治。只靠以流行病學之研究,解明之智識所研擬之綜合防治對策,而達無病柑苗之田間健康管理。

(一) 無病柑苗之生產與種植為首要:將頂稍微體嫁接法脫毒優良品種,以檢疫技術PCR檢疫法檢驗為無病,用於建立無病原種圃(網室),採穗圃及防蟲網室內無病柑苗之培育體系,以供給柑農無病苗。建立健苗之驗證制度(health certificate),來管理無病苗生產體系。
(二) 田間衛生:於無病苗定植前,掘除田間病株及中間寄主烏柑子而清除田間木蝨之傳染源。在未曾種柑橘之無病源地區新種無病苗亦是一良策。
(三) 媒介昆蟲柑橘木蝨之驅除:在萌芽期施適當殺蟲劑,以防止健株再受感染使柑樹永續生產,延長樹齡,達高品質之高生產量。在三月春芽期及8月夏芽期木蝨帶毒最高,是感染危險期,需加強噴藥防治,引進利用外寄生之天敵亮腹釉小蜂(Tamarixia radiata),用於媒介木蝨之生物防治,以有效降低木蝨密度,而此天敵已定著國內田間,無須再施放。

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(作者:蘇鴻基)

 
椪柑葉上病徵,由左2片為健葉,第3、4葉為成熟葉黃萎病徵,右三片為病株新生葉萎縮細小呈萎黃缺鋅症狀。   桶柑病果:小粒黃熟果略帶綠,右大粒為健果。
 
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