07陳姿菡-口蹄疫及豬水病抗體間接型ELISA檢測方法之研發
本試驗針對口蹄疫(FMD)及豬水疱病(SVD)等豬隻高度傳染水疱性疾病,主要利用原核表現系統完成建立此二種疾病區別診斷之FMDV及SVDV 間接型ELISA抗體檢測方法。針對FMDV結構蛋白(SP)VP1免疫決定位之基因組核酸序列設計引子,以RT-PCR 方法增幅病毒核酸,建構基因重組原核表現系統,並量產重組結構蛋白應用於ELISA之開發。經試驗結果顯示分子量如預期之大小約25 kDa,且重組蛋白質與豬抗血清之分析特異性呈陽性反應。以免疫、感染及SPF等豬血清之FMDV-SP抗體檢測診斷敏感性達 84.1 %-96.7 % 及診斷特異性約達93 %-100 %。另設計豬水疱病病毒 SVDV-SP之免疫決定位之核酸序列之特異性引子,以RT-PCR 方法增幅病毒核酸,建構基因重組原核表現系統,並定序確認核酸序列符合,且重組蛋白分子量如預期之大小約100 kDa,可與豬抗血清呈專一特異性之陽性反應。於SVDV-SP ELISA之結果顯示本方法的最低分析敏感性可達10-2倍,且於30支標準血清檢測結果最早在感染後第6天可被測出SVDV-SP抗體,其診斷敏感性及診斷特異性皆可達100 %,於進口豬隻及田間之血清樣品經與二種商品化ELISA 套組比較SVDV-SP抗體檢測結果符合率各別為90-93 % 及 85-88 %。最後證實FMDV及SVDV抗體間接型ELISA檢測方法可檢出專一性的抗體而無交叉反應,且不會與水疱性口炎(VS)抗體產生非特異性反應。
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