農業知識庫
利用多目標PCR檢測基因改造木瓜
作者:陳富永,蔡奇助,陳國憲,王雲平,楊藹華
公佈日期:100 年 07 月 07 日
期刊
1097
木瓜產業受到木瓜輪點病毒(papaya ringspot virus, PRSV)的嚴重威
脅,產量大減,中興大學植物病理系教授葉錫東博士培育的抗輪點病毒基因
改造木瓜,可有效降低此病毒的威脅。但因基因改造作物是否影響生態及食
用安全性之疑慮,政府單位及消費大眾均極關切基因改造木瓜的檢測。本研
究利用PCR 反應,進行核酸層次的檢測,以針對PRSV 外鞘蛋白基因(coat
protein, CP)設計專一性之引子,可以增幅一820 bp 之DNA 片段,正確檢測
出基因改造木瓜。為提高檢測之精準性及效率, 同時開發出多目標
PCR(multiplex PCR)技術,針對殖入木瓜之多個基因及DNA 序列做為檢測
對象,包括PRSV CP 基因、NPT-II(neomycin phosphotransferase)基因、
NOS(nopaline synthase) terminator 序列、及CaMV(cauliflower mosaic virus)
35S promoter 序列等設計專一性引子,利用多組核酸引子,同時進行PCR
反應,在基因改造木瓜中可分別增幅359 bp、295 bp、180 bp、及134 bp
四個片段;再加上木瓜本身的木瓜酵素(papain)基因之專一性引子(增幅211
bp),做為內部對照(internal control)達到多重確認基因改造木瓜檢測精準性
之效果。
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