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綠色螢光蛋白質豬胚幹細胞
發文日:101/02/16
綠色螢光蛋白質豬胚幹細胞雖然從畜產動物建立具有分化多能性的胚幹細胞較鼠類困難,目前已順利自著床前的囊胚成功建立與衍生豬胚幹細胞株,以外源性綠色螢光蛋白質報導基因(green fluorescent protein,GFP)對豬胚幹細胞進行基因轉殖,並探討經GFP基因轉殖後對於豬胚幹細胞分化能力之影響,期能建立可供體內追蹤之豬胚幹細胞株。試驗結果顯示,利用電穿孔法(electroporation)進行豬胚幹細胞之基因轉殖,成功將外源性GFP報導基因轉殖入豬胚幹細胞,轉殖後之豬胚幹細胞穩定表現GFP綠色螢光,且利用免疫細胞化學染色法進行豬胚幹細胞之分化多能性專一抗體如Oct-4、AP、SSEA-4、TRA-1-60與TRA-1-81之分析,均可得到陽性結果,顯示經GFP轉染之豬胚幹細胞株仍具有分化多能性,且經由體外誘發神經分化試驗,誘導後之衍生細胞表現神經專一性抗體如nestin、NFL、MAP2、TH、ChAT之分析,亦呈現陽性之結果,證實具分化成為神經細胞之分化潛能,顯示本試驗所建立之攜有外源性GFP報導基因之豬胚幹細胞株,為符合胚幹細胞分化多能性之新穎細胞株。而將此株攜有GFP之豬胚幹細胞移植於SD大鼠腦部,以追蹤移植之豬胚幹細胞於大鼠腦部之存活與生長情形。試驗結果顯示在持續3個月的追蹤期間,均可於大鼠腦部測得螢光反應,顯示攜有GFP之豬胚幹細胞確實可做為移植後之追蹤標的細胞,且過3個月的活體影像追蹤後,將試驗SD大鼠犧牲並進行腦組織之影像分析,結果發現處理組腦組織的螢光監測量與對照組之差異最高可達2倍以上,顯示所偵測到的螢光反應確定來自於腦組織。未來此株攜有GFP之豬胚幹細胞不僅可於胚幹細胞體內移植試驗之後續追蹤之用,並可進一步藉由豬胚幹細胞的研究模式,進而得到人類胚幹細胞研究上所不易取的重要資訊,並希望能運用於神經損傷與退化之治療模式研究,極具應用價值。