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東亞蘭嵌紋病毒 (Cymbidium mosaic virus)

簡稱:CyMV

病徵:
  CyMV 感染之蘭株經常有產生壞疽型病徵之傾向,如黑色壞疽斑點 (spots)、壞疽條紋 (line patterns) 等,產生之部位除葉部、莖部外,花部壞疽也是CyMV特有之病徵。最常見之例子是報歲蘭、嘉德麗亞蘭、文心蘭、虎頭蘭、萬代蘭及蝴蝶蘭。壞疽斑有時只出現於葉片下表面,而不發生於上表面,此種現象在文心、石斛、萬代及蝴蝶 蘭均有發現,因此常被栽培者誤認為真菌感染所致。部份感染CyMV之蘭屬如虎頭蘭、報歲蘭、文心蘭及蝴蝶蘭也會產生黃綠斑駁之嵌紋 (mosaic) 或黃化條斑型 (chlorotic streak) 病徵。人工栽培之蘭園中 CyMV 與 ORSV 複合感染同一蘭株之現象極為普遍,對蘭株之影響有加成效果 (synergistic effect),病徵會遠比單獨感染時嚴重許多。另外也有部份蘭花種類感染後並不表現任何可辨識病徵。

病原菌

分  類: CyMV 乃馬鈴薯X群病毒 (Potexviruses) 之一員。純化之 CyMV 病毒顆粒抗原性極強 (strong immunogen),經免疫注射後可產生高力價抗血清,且專一性相當高,與其同源抗原 (homologous antigen) 反應極強。根據文獻報告 Potexviruses 病毒群中只有 Potato virus X (PVX) CyMV 有部份之血緣關係,而CyMV 是唯一發生於蘭科植物之 Potexviruses,因此在鑑定或檢定上並不會發生太大困擾。
分  佈: CyMV 被認為是全球各地人工栽培蘭株上發生最普遍之病毒,根據 Zettler 等之報告,共有包括嘉德麗亞蘭及蝴蝶蘭等 30 種蘭屬植物曾經被紀錄可以被 CyMV 感染,而且均屬人工栽培一段時間之蘭株,彼等並發現在這些蘭屬之 639 株野生蘭株中未有任何病毒感染之情形,顯見病毒之感染與人工栽培有密切關係。
寄  主:

雖然利用人工接種之方式 CyMV 也可以感染 Chenopodium amaranticolorDatura stramonium Cassia occidentalis 形成局部病斑,但是其天然寄主仍以蘭科植物為主。

形  態: CyMV之病毒形態為絲狀易彎曲顆粒,長度 415-475nm,寬度 13-18nm
傳播方式:

主要藉機械性傷口傳染,未發現有任何昆蟲可以媒介此病毒,蘭園中可經由病株汁液、工具、栽植過病株之盆缽、重複使用之植材、蘭株間之直接接觸,甚至灌溉水傳播此病毒。另外近年來蘭花種苗生產常用之分生組織培養,也是傳播此病毒之一項極普遍而有效之途徑。

理化性質: CyMV 之理化性質中已知的包括:活體外 (in vitro) 耐熱度 65-70℃;於室溫下病毒可維持活性至少 7 天以上;RNA 含量 6%。鞘蛋白單位分子量 27.5 KDa;吸光度 260/280 比值 1.16
診斷技術:

利用觀察病徵方式進行 CyMV 之診斷,在少數被感染後可以穩定出現典型病徵之蘭花種類上是可行的,但對於大多數蘭種而言,被 CyMV 感染後所表現之病徵並不穩定,因此,只依據病徵診斷並不可靠。事實上蘭花感染病毒後常須一段時日才會表現病徵,此一病徵潛伏期之長短,隨蘭花種類及其生長狀態而有不同,有些蘭種甚至根本不出現病徵。若仰賴病徵之表現作為判別感染之唯一依據,則與事實會有相當之出入。延遲或錯誤之診斷常會導致病毒之擴大流行,故應配合其他更敏感之方法進行診斷方為上策。過去曾經被應用於 CyMV 診斷之方法包括:

  1. 指示植物接種法:
可利用之指示植物包括
Cassia occidentalisC. amaranticolorC. quinoaTetragonia expensa Datura stramonium 等。然而影響接種成功與否的因素很多,除非操作者經驗豐富,否則誤診之機會仍然很大。而且若以此作為例行之檢定方法則必需有設備良好、空間足夠的溫室與維護管理之人工。
  2.

電子顯微鏡觀察法:
此乃以觀察病株有否
CyMV之典型病毒顆粒作為判別之依據。另外配合專一性抗體之應用 ( Immuno-specific electron microscopy, ISEM) 也能提升電顯觀察之敏感度。

  3.

光學顯微鏡觀察法:
此乃根據
Christie and Edwardson (1977) 所發展之技術,利用染色法觀察病毒於寄主細胞內所形成之內含體 (inclusion body) ,根據報告 CyMV 於寄主細胞質中產生帶狀內含體 (banded body),作為判別之依據。

  4.

抗血清檢定法:
此乃目前各種檢查法中應用最普遍的一種。常用之血清檢定法包括免疫擴散法
(SDS-immunodiffusion test)、酵聯抗體法 (ELISA) 及免疫點漬法 (immunoblotting test) 等三種。

  5.

核酸檢查法:
以病毒核酸為檢測對象,常用方法包括核酸探針雜配法
(DNA  probe hybridization),及晚近生物技術上所廣泛應用之聚合酵素連鎖反應 (polymerase chain reaction, 簡稱 PCR) 均可適用於 CyMV 之檢定。

發生生態:
  有報告指出,在野生蘭株中未發現有任何病毒感染之情形,因此該作者推測蘭花病毒之發生與人工栽培有密切關係。到底最初蘭花病毒從何而來已無法追究,但此病毒廣泛存在全世界各地蘭園,確是無法否認之事實,顯示 CyMV 之普遍發生與人工栽培時所採取的無性繁殖方式有絕對之關係。其次 CyMV 是一種性質極為穩定之病毒,在離開寄主細胞後,雖無法繁殖其個體,但仍可存活相當時日,人工栽培蘭花時所採取之任何可以造成機械性傷口之機會,均可導致病毒之傳播,加上近年來蘭花產業逐漸規模化以後,為了達到快速繁殖種苗所採用之組織培養技術,更加速病毒之全面蔓延,而世界上各地區之貿易交流及有效率之運輸網路,更是蘭花病毒全球分佈之主要因素。當然近百年來當蘭花逐漸由貴族式之栽培模式轉變成平民化之花卉時,在快速量化之過程中,人們對於病毒檢疫之忽視也是造成蘭花病毒廣泛分佈之另一項重要原因。

防治方法:

一、 栽植無病毒苗。收集外來品種時,引入前須先經病毒檢定確定無毒者,再引入種植。
二、 就可疑帶毒植株進行病毒檢定,確定帶毒者立即銷燬植株、植材及盆缽。
三、 養成栽培過程中避免造成任何植株受傷之習慣。例如澆水時避免過度激烈沖刷,以減少植株間葉片磨擦受傷之機會。
四、 避免重複使用未經處理之植材及盆缽。
五、 避免過度密植,以減少植株間機械磨擦受傷之機會;避免立體式栽植,或使溉溉水有在不同植株上相互流通之機會。
六、 分生組織培養前母株須經病毒檢定。
七、 移植苗木時避免在同一容器內一起浸藥。
八、 切花或操作用工具必須消毒。常用之消毒方法有如下幾種:
  1. 乾熱消毒法:利用烘箱在 180℃ 至少維持 1 小時。
  2. 濕熱消毒法:浸於沸水中至少 15 分鐘。
  3. 火焰消毒法:將工具上接觸過植物汁液之部位以火焰燒 10-20 秒。
  4. 化學藥品消毒法:以 5% 氫氧化納或 3-10% 磷酸三鈉溶液浸泡至少 1 分鐘。
  5. 牛奶消毒法:鮮奶浸泡後可立即使用,但是對 ORSV 病毒無效。

參考文獻:

1.   張清安。1994。蘭花病毒病之特性與防治。蘭花經濟栽培技術。129-148 頁。賴本智等主編。行政院青年輔導委員會創業輔導叢書三-17。行政院青年輔導委員會出版。
2.   張清安。1996。植物病毒鑑定及診斷新技術。植物保護新科技研討會專刊。35-45頁。臺灣省農業試驗所特刊第57號。臺灣省農業試驗所編印。
3.   張清安、陳金枝。1997。應用RT-PCR 檢定技術偵測二種重要蘭花病毒之開發研究。125頁。八十五年度臺灣農業試驗研究成果年報。臺灣省政府農林廳編印。
4.   Chang, C. A., and Pang, J. H. 1990. Preparation of antisera against Cymbidium mosaic virus and Odontoglossum ringspot virus and their uses in serological indexing for orchid industry in Taiwan.  Plant Prot. Bul. 32:336.
5.   Hollings, M., and Stone, O. M. 1977. Cymbidium rinspot virus.  CMI/AAB.  Description of Plant Viruses, No. 178.
6.   Hsu, H. T., Vongsasitorn, D., and Lawson R. H. 1992. An improved method for serological  detection of Cymbidium mosaic potexvirus infection in orchids.  Phytopathoplogy 82:491-495.
7.   Lawson, R. H., and Hsu, H. T. 1995.  Orchid. p.409-420.  In: Virus and Virus-like Diseases of Bulb and Flower Crops.  Loebenstein et. al. (eds.), John Wiley & Sons, West Sussex, United Kingdom, 543 pp.
8.   Zettler, F. W., Ko, N. J., Wisler, G. C., Elliott, M. S., and Wong, S. M. 1990.  Viruses of orchids and their control.  Plant Disease 74:621-625.
    
感染CyMV 之蝴蝶蘭葉片背面出現褐色壞疽斑塊   複合感染ORSV及CyMV之蝴蝶蘭葉片出現較單獨感染嚴重之大型壞疽及黃花斑塊

(動植物防疫檢疫局,2000,植物保護圖鑑系列6,第59-65頁)